Plasmide CRISPR d'Activation (h) Angptl4: sc-401369-ACT

ANGPTL4 code l’angiopoïétine‑like 4 (Angptl4), une glycoprotéine sécrétée induite par des signaux liés aux nutriments et à l’oxygène, qui module la gestion des lipides et la biologie vasculaire. Angptl4 inhibe la lipoprotéine lipase afin de réguler le métabolisme des lipoprotéines riches en triglycérides et s’inscrit dans des programmes métaboliques contrôlés par la signalisation PPAR, reliant les réponses du tissu adipeux et du foie au jeûne et à l’inflammation. Dans le milieu extracellulaire, elle peut influencer le comportement endothélial, la fonction de barrière et le remodelage de la matrice extracellulaire, reliant l’état métabolique à l’homéostasie tissulaire. Une expression dérégulée d’ANGPTL4 a été associée à des troubles métaboliques, à des microenvironnements inflammatoires et à des processus liés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour des études mécanistiques sur les flux lipidiques et les réponses vasculaires.

Angptl4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ANGPTL4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Angptl4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ANGPTL4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ANGPTL4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Angptl4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ANGPTL4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Angptl4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Angptl4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ANGPTL4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.