Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400477-ACT

O gene humano **ANGPT2** codifica a angiopoietina-2 (Ang-2), um fator de crescimento vascular secretado que se liga ao recetor tirosina-quinase endotelial **TEK/TIE2** e modula a sinalização angiopoietina–TIE. A Ang-2 atua como um regulador dependente do contexto da remodelação vascular, da ativação endotelial e da desestabilização dos vasos, integrando sinais de hipóxia e de citocinas inflamatórias para influenciar a integridade da barreira e o tráfego de leucócitos. Por meio de comunicação cruzada com a angiogénese impulsionada por VEGF e com vias inflamatórias, a expressão de **ANGPT2** ajuda a moldar a sobrevivência e a migração das células endoteliais e as interações com pericitos. A desregulação de **ANGPT2** está associada à angiogénese patológica e à inflamação vascular observadas em microambientes tumorais, retinopatias e complicações vasculares cardiometabólicas, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos de disfunção endotelial.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANGPT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANGPT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANGPT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANGPT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Angiopoietin 2/Ang-2/ANGPT2 em células tumorais com expressão de ANGPT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.