ANG I Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401766-LAC

Il gene umano **ANG** codifica l’angiogenina, una ribonucleasi secreta (superfamiglia RNasi A) che si lega ai recettori di superficie cellulare e ai componenti della matrice extracellulare per regolare la biologia delle cellule endoteliali, le interazioni con lo stroma e il metabolismo dell’RNA adattativo allo stress. ANG sostiene i programmi angiogenici promuovendo segnali di migrazione e proliferazione e può traslocare nel nucleo per influenzare la trascrizione dell’rRNA e la biogenesi dei ribosomi. In condizioni di stress cellulare, il taglio dei tRNA mediato dall’angiogenina genera frammenti derivati dai tRNA che modulano la traduzione e la dinamica dei granuli da stress, collegando ANG alle risposte integrate allo stress. Una deregolazione dell’espressione e dell’attività di ANG è stata associata a neovascolarizzazione patologica, infiammazione e rimodellamento del microambiente tumorale; inoltre, varianti di ANG sono state studiate in contesti di neurodegenerazione, inclusa la vulnerabilità dei motoneuroni.

Le particelle di attivazione lentivirale ANG I (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ANG in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ANG I (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ANG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ANG I. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ANG e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.