Plásmido Doble Nickase (h) Amelogenin: sc-403337-NIC

AMELY codifica la isoforma de amelogenina del cromosoma Y, una proteína secretada de la matriz extracelular que contribuye a la biomineralización del esmalte y al desarrollo dental mediante la regulación de la nucleación y el crecimiento de los cristales de hidroxiapatita, así como de la organización de la matriz. La amelogenina participa en el ensamblaje de la matriz del esmalte y en su procesamiento proteolítico durante la amelogénesis, influyendo en las interacciones epitelio‑mesénquima y en los programas de deposición mineral. La variación genética que afecta la expresión o la estructura de la amelogenina se ha vinculado a defectos de formación del esmalte y a fenotipos dentro de los trastornos del espectro de la amelogénesis imperfecta, lo que respalda su relevancia para la biología del desarrollo craneofacial y dental. Debido a que AMELY está ligado al cromosoma Y y está estrechamente relacionado con AMELX, también es útil para estudiar la biología de los cromosomas sexuales y la regulación específica de parálogos en modelos odontogénicos.

Amelogenin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AMELY en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AMELY. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AMELY. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AMELY alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.