Ameloblastin Double Nickase Plasmid (h): sc-403086-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ameloblastin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ameloblastin Double-Nickase-Plasmid (h) und Ameloblastin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AMBN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ameloblastin: sc-271012
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ameloblastin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403086-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ameloblastin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403086-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AMBN kodiert Ameloblastin, ein sekretiertes Protein der Schmelzmatrix, das von Ameloblasten exprimiert wird und zur Schmelzbildung beiträgt, indem es die Organisation der extrazellulären Matrix, die Mineralablagerung sowie die Adhäsion an der Grenzfläche zwischen Ameloblasten und Matrix reguliert. Ameloblastin ist an Entwicklungsprogrammen beteiligt, die während der Zahnmorphogenese die Polarität von Epithelzellen, deren Differenzierung und den Umbau der Matrix koordinieren, und seine Prozessierungsprodukte können die Zell‑Matrix‑Signalübertragung beeinflussen. Eine Störung der AMBN-Funktion ist mit Schmelzdefekten und verändertem Verhalten von Ameloblasten assoziiert; zudem wird eine Dysregulation von AMBN als Marker in Studien zur odontogenen Differenzierung und zu verwandten Pathologien genutzt. Diese Eigenschaften machen AMBN zu einem nützlichen Lokus, um in der kraniofazialen Forschung die Biologie der extrazellulären Matrix, Mineralisierungsprozesse und epithel‑mesenchymale Interaktionen zu untersuchen.
Ameloblastin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AMBN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AMBN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AMBN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AMBN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.