ALP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401877

Visão geral

PDLIM3 codifica a ALP (proteína LIM associada à actinina), um adaptador da família PDZ-LIM enriquecido no músculo estriado, que se localiza no disco Z e liga filamentos de actina baseados em α-actinina a complexos de sinalização. Por meio dos seus domínios PDZ e LIM, a ALP dá suporte à montagem do sarcômero, à mecanotransdução e à organização do citoesqueleto, atuando como plataforma (scaffold) para interações proteicas que coordenam a dinâmica da actina e vias responsivas ao estresse. A alteração da expressão de PDLIM3 ou a perturbação da integridade do disco Z está associada a uma arquitetura miofibrilar comprometida e tem sido estudada no contexto de cardiomiopatia e disfunção do músculo esquelético. Como marcador da homeostase estrutural muscular, a ALP é relevante para investigar como plataformas citoesqueléticas ajustam a função contrátil, a adesão celular e a sinalização de estresse.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ALP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PDLIM3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PDLIM3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PDLIM3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ALP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PDLIM3 para a investigação da sinalização de ALP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PDLIM3 críticos para a função ALP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PDLIM3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ALP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ALP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PDLIM3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ALP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ALP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PDLIM3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PDLIM3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.