AKAP 9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405430

Panoramica

AKAP9 codifica la proteina di ancoraggio dell’A-chinasi 9 (AKAP9), un grande scaffold che organizza spazialmente la PKA e altri enzimi di segnalazione in siti subcellulari definiti. AKAP9 si localizza ai centrosomi e all’apparato di Golgi, supportando l’organizzazione dei microtubuli, l’integrità del Golgi e il coordinamento della progressione del ciclo cellulare e della dinamica del fuso mitotico. Attraverso una segnalazione chinasica compartimentalizzata, influenza processi guidati dalla fosforilazione che regolano il rimodellamento del citoscheletro e il traffico intracellulare. Un’alterata espressione di AKAP9 o riarrangiamenti del gene sono stati riportati nel cancro e in altri disturbi proliferativi, rendendolo un bersaglio utile per studiare reti di segnalazione deregolate e la stabilità cromosomica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AKAP 9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AKAP9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AKAP9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AKAP9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AKAP 9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AKAP9 per lo studio della segnalazione di AKAP 9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AKAP9 critici per la funzione di AKAP 9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AKAP9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AKAP 9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AKAP 9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AKAP9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AKAP 9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AKAP 9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AKAP9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AKAP9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.