Plasmide CRISPR d'Activation (h) AKAP 9: sc-405430-ACT

AKAP9 code la protéine d’ancrage de l’A-kinase 9 (AKAP9), un grand échafaudage qui organise spatialement la PKA ainsi que d’autres enzymes de signalisation dans des compartiments subcellulaires spécifiques. Elle se localise aux centrosomes et à l’appareil de Golgi, où elle soutient la nucléation des microtubules, l’assemblage du fuseau mitotique et le maintien de la polarité cellulaire, influençant ainsi la progression du cycle cellulaire et le trafic intracellulaire. En ancrant la signalisation AMPc/PKA et en coordonnant des complexes protéiques impliqués dans la dynamique du cytosquelette, AKAP9 contribue à des événements de phosphorylation régulés lors de la mitose et de la migration. Une expression altérée d’AKAP9 ou des variations structurelles ont été associées à une dérégulation des signaux prolifératifs et à une instabilité chromosomique en biologie du cancer, et ont également été étudiées dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et cardiaques.

AKAP 9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de AKAP9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AKAP 9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus AKAP9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription AKAP9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AKAP 9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus AKAP9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AKAP 9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AKAP 9 dans les cellules tumorales présentant une expression de AKAP9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.