aggrecan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400760

Übersicht

ACAN kodiert Aggrecan, ein großes Chondroitinsulfat-Proteoglykan, das durch Bindung an Hyaluronan und Link-Protein das hydratisierte Rückgrat der extrazellulären Knorpelmatrix bildet und so die Widerstandsfähigkeit gegenüber Druckbelastung ermöglicht. Der Aggrecan-Umsatz wird durch anabole Programme der Chondrozyten und katabole extrazelluläre Proteolyse koordiniert, einschließlich der Spaltung durch ADAMTS-Aggrecanasen sowie Matrix-Remodelling-Mechanismen, die die Gewebebiomechanik prägen. Störungen der ACAN-Expression oder der Aggrecan-Prozessierung beeinträchtigen die Knorpelhomöostase und werden mit degenerativen sowie entwicklungsbedingten Skelettphänotypen in Verbindung gebracht, was ACAN zu einem zentralen Ansatzpunkt für die Untersuchung der Organisation der extrazellulären Matrix und der Mechanobiologie macht. ACAN wird daher häufig als Marker und funktioneller Determinant in Studien zur Chondrozytendifferenzierung, zur Wachstumsplattenbiologie und zum Aufbau der Knorpelmatrix verwendet.

Das aggrecan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ACAN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ACAN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ACAN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die aggrecan-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ACAN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der aggrecan-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ACAN-Exone abzielen, die für die aggrecan-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ACAN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom aggrecan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom aggrecan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ACAN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das aggrecan HDR-Plasmid (h) und aggrecan HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ACAN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ACAN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.