ADRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400802

Visão geral

PLIN2 codifica a proteína relacionada à diferenciação do tecido adiposo (ADRP), uma proteína de revestimento de gotículas lipídicas que regula o armazenamento de lipídios neutros e a dinâmica da biogênese, expansão e renovação dessas gotículas. A ADRP coordena interações entre gotículas lipídicas e membranas celulares e influencia processos metabólicos, incluindo o manejo de ácidos graxos, respostas ao estresse lipotóxico e a comunicação entre organelas em hepatócitos, adipócitos e macrófagos. Por seu papel no tráfego e no armazenamento intracelular de lipídios, PLIN2 é frequentemente estudado no contexto de esteatose hepática, disfunção metabólica associada à obesidade e formação de células espumosas durante a aterogênese. Alterações na expressão de PLIN2 também são investigadas em cânceres com fenótipos ricos em gotículas lipídicas, nos quais programas de armazenamento de lipídios podem sustentar a proliferação e a adaptação ao estresse oxidativo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ADRP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PLIN2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PLIN2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PLIN2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ADRP.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PLIN2 para a investigação da sinalização de ADRP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PLIN2 críticos para a função ADRP
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PLIN2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ADRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ADRP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PLIN2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ADRP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ADRP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PLIN2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PLIN2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.