ADM Plasmide Double Nickase (h): sc-402779-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ADM Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ADM Double Nickase Plasmid (h) e il ADM Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADM. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ADM Antibody (HTA171/E8): sc-53153
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ADM Plasmide Double Nickase (h) | sc-402779-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ADM Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402779-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’adrenomedullina (ADM) è un ormone peptidico secreto, processato a partire da una preproproteina più grande ed espresso ampiamente nei tessuti vascolari ed endocrini. Attraverso la segnalazione mediata dal recettore simile a quello della calcitonina (CALCRL) in complesso con RAMP2 o RAMP3, ADM attiva cAMP/PKA e, a valle, vie di segnalazione collegate a MAPK e PI3K che regolano la vasodilatazione, la funzione di barriera endoteliale, le risposte angiogeniche e l’adattamento cellulare allo stress. ADM è indotta da ipossia e segnali infiammatori e contribuisce al rimodellamento vascolare, all’omeostasi dei fluidi e alla comunicazione immuno–stromale. Una segnalazione di ADM deregolata è stata associata a disfunzioni cardiometaboliche, stati infiammatori e angiogenesi associata ai tumori, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca sul microambiente e sulla biologia vascolare.
ADM Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADM nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADM. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADM. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADM interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.