ACTBL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415610-ACT

ACTBL2 codifica a actina beta-like 2, uma proteína da família das actinas do citoesqueleto implicada na organização de redes de actina filamentosa que sustentam a forma celular, a adesão e a motilidade. A dinâmica da actina coordena processos-chave como a citocinese, o tráfego vesicular e a mecanotransdução, integrando-se a vias reguladas por GTPases da família Rho e por proteínas ligantes de actina. Embora o ACTBL2 seja menos caracterizado do que o ACTB canônico, alterações na remodelação da actina são amplamente relevantes para fenótipos que envolvem migração, invasão e arquitetura tecidual aberrantes. Assim, a modulação da expressão de ACTBL2 oferece uma ferramenta útil para investigar as contribuições do citoesqueleto para respostas ao estresse e para mudanças dependentes de sinalização na morfologia celular.

ACTBL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ACTBL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ACTBL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ACTBL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ACTBL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ACTBL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ACTBL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ACTBL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ACTBL2 em células tumorais com expressão de ACTBL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.