Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACE (h): sc-400759

Présentation

L’enzyme de conversion de l’angiotensine (ECA) est une dipeptidyl-carboxypeptidase dépendante du zinc qui catalyse la conversion de l’angiotensine I en angiotensine II, un peptide vasoactif, et dégrade la bradykinine, ce qui en fait un régulateur central du système rénine–angiotensine. En modulant la signalisation angiotensine II/AT1R, l’ECA influence le tonus vasomoteur, l’équilibre sodé et hydrique, le stress oxydatif et des programmes inflammatoires qui recoupent des réponses liées aux voies MAPK et NF-κB dans les tissus vasculaires et rénaux. L’activité de l’ECA contribue à la fonction endothéliale et à l’homéostasie des peptides extracellulaires, et les altérations d’expression de l’ECA ou certaines variantes sont fréquemment étudiées dans la biologie des maladies cardiovasculaires et rénales. Ces fonctions font de l’ECA un nœud pertinent pour étudier la régulation de la pression artérielle, le remodelage vasculaire et le remodelage tissulaire associé à l’inflammation dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACE (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ACE dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ACE, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ACE à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ACE pour l'étude de la signalisation de ACE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ACE essentiels à la fonction de ACE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ACE pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ACE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ACE. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACE plasmide HDR (h) et le ACE (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ACE pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ACE définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.