ABHD5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402273-ACT

O ABHD5 humano (também conhecido como CGI-58) codifica um coativador associado a gotículas lipídicas que conecta a mobilização de lipídios neutros ao equilíbrio energético celular, ao estimular a atividade da lipase de triglicerídeos do tecido adiposo e promover a hidrólise de triacilgliceróis. Por meio da regulação da renovação das gotículas lipídicas, do fluxo de ácidos graxos e da β-oxidação mitocondrial a jusante, o ABHD5 ajuda a coordenar a homeostase metabólica e a sinalização lipídica. A disfunção do ABHD5 está ligada ao armazenamento lipídico anormal e ao acúmulo ectópico de lipídios, conectando essa via a fenótipos hereditários de armazenamento de lipídios neutros e a mecanismos mais amplos de doenças metabólicas. Em contextos de câncer e inflamação, alterações no metabolismo lipídico e na dinâmica das gotículas lipídicas influenciadas pelo ABHD5 podem remodelar a composição de membranas e as respostas ao estresse, tornando-o relevante para o mapeamento de vias em diversos sistemas modelo.

ABHD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ABHD5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABHD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ABHD5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ABHD5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABHD5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ABHD5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABHD5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABHD5 em células tumorais com expressão de ABHD5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.