15-LO2 Plasmide Double Nickase (h): sc-404699-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- 15-LO2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il 15-LO2 Double Nickase Plasmid (h) e il 15-LO2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ALOX15B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: 15-LO2 Antibody (F-10): sc-376795
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
15-LO2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404699-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
15-LO2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404699-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ALOX15B umano codifica la 15-lipossigenasi-2 (15-LO2), una diossigenasi non-eme contenente ferro che ossigena gli acidi grassi polinsaturi generando mediatori lipidici bioattivi, come il 15-HETE a partire dall’acido arachidonico. Attraverso la regolazione delle reti degli eicosanoidi e dei mediatori specializzati pro-risoluzione, la 15-LO2 influenza la segnalazione infiammatoria, la differenziazione epiteliale, l’omeostasi redox e il rimodellamento dei lipidi di membrana. L’attività di ALOX15B si interseca con il metabolismo dell’acido arachidonico, la segnalazione mediata da PPAR e le vie guidate dalle citochine che modellano le risposte tissutali al danno e agli stimoli immunitari. Un’espressione disregolata o profili alterati dei prodotti lipidici sono stati associati a patologie legate all’infiammazione e a cambiamenti correlati al cancro nel comportamento delle cellule epiteliali, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla segnalazione lipidica.
15-LO2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ALOX15B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ALOX15B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ALOX15B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ALOX15B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.