β ig-h3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403770

Übersicht

TGFBI kodiert β ig-h3 (TGFBIp), ein Protein der extrazellulären Matrix, das durch TGF‑β‑Signalgebung induziert wird und an Kollagene, Fibronectin und Integrine bindet, um Zelladhäsion, Migration und die Organisation der Matrix zu regulieren. Über seine Funktionen beim ECM‑Remodeling und in der integrinvermittelten Signalübertragung beeinflusst β ig-h3 die epithelial‑mesenchymale Transition, die Wundheilung und die Gewebehomöostase. Eine veränderte TGFBI‑Expression wurde mit fibrotischen Prozessen und Tumor‑Stroma‑Interaktionen in Verbindung gebracht, die Invasion und metastatisches Potenzial beeinflussen. Pathogene Varianten und eine dysregulierte Ablagerung von β ig-h3 stehen außerdem mit stromalen Hornhautdystrophien und abnormer Proteinaggregation in okulären Geweben in Zusammenhang.

Das β ig-h3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TGFBI-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TGFBI-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TGFBI nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β ig-h3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TGFBI-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β ig-h3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TGFBI-Exone abzielen, die für die β ig-h3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TGFBI-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β ig-h3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β ig-h3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TGFBI-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β ig-h3 HDR-Plasmid (h) und β ig-h3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TGFBI-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TGFBI-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.