Plásmido CRISPR de Activación (h) β-Amyloid: sc-400520-ACT

APP codifica la proteína precursora del amiloide, una glucoproteína transmembrana de tipo I que sufre un clivaje secuencial por las secretasas α, β y γ para generar péptidos, incluido el β-amiloide. El procesamiento de APP influye en el tráfico endosomal, la función sináptica y la actividad neuronal, y se integra con las vías de transporte vesicular y proteostasis. La producción o eliminación desregulada de β-amiloide se asocia fuertemente con la patología relacionada con la enfermedad de Alzheimer y se estudia ampliamente en el contexto de la neuroinflamación, el estrés oxidativo y las cascadas de señalización amiloidogénicas. La APP humana y el β-amiloide también sirven como lecturas moleculares clave para investigar la actividad de las secretasas, la biología de los microdominios de membrana y las respuestas neuronales al estrés.

β-Amyloid El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de APP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

β-Amyloid El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus APP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional APP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de β-Amyloid. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo APP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de β-Amyloid en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía β-Amyloid en células tumorales con expresión de APP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.