Plasmide Double Nickase (h) α-actinin-2: sc-401186-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) α-actinin-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide α-actinin-2 Double Nickase (h) et le plasmide α-actinin-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ACTN2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: α-actinin Antibody (H-2): sc-17829
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) α-actinin-2 | sc-401186-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) α-actinin-2 | sc-401186-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACTN2 code l’α-actinine-2, une protéine de pontage de l’actine insensible au calcium, enrichie au niveau des disques Z et des costamères dans le muscle strié, où elle ancre les filaments d’actine et organise l’architecture du sarcomère. Par ses interactions avec la titine, les intégrines, les canaux ioniques et des adaptateurs de signalisation, l’α-actinine-2 contribue à la mécanotransduction, au remodelage du cytosquelette et aux voies de transmission de la force qui couplent l’activité contractile aux réponses cellulaires. Des altérations d’ACTN2 ont été associées à des cardiomyopathies héréditaires et à une désorganisation myofibrillaire, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la stabilité structurale et de la signalisation liée au stress dans les cardiomyocytes et les fibres musculaires squelettiques. Les applications de recherche incluent couramment l’analyse des réseaux protéiques du disque Z, la dynamique d’assemblage du sarcomère et les relations génotype–phénotype dans des modèles de maladies musculaires humaines.
α-actinin-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ACTN2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ACTN2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ACTN2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ACTN2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.