α-actinin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2): sc-430958-KO-2

Visão geral

Actn1 codifica a α-actinina-1, uma proteína de ligação à actina insensível ao Ca2+ que faz a ligação cruzada da actina filamentosa e organiza redes de actina cortical, fibras de stress e estruturas do citoesqueleto associadas à adesão. Em células de rato, a α-actinina-1 sustenta a dinâmica das adesões focais ligadas a integrinas, a mecanotransdução e a migração celular, coordenando a remodelação da actina com polos de sinalização como as GTPases da família Rho. Pelo seu papel na manutenção da tensão do citoesqueleto e da estabilidade da membrana, a ACTN1 é relevante para estudos de biogénese plaquetária e função hemostática, nos quais alterações na arquitetura da actina podem perturbar a formação de proplaquetas e a resiliência do citoesqueleto. A desregulação da função da α-actinina-1 tem sido associada a doenças plaquetárias hereditárias e a fenótipos mais amplos envolvendo adesão e arquitetura tecidular, tornando o Actn1 um alvo útil para modelar mecanismos de doença impulsionados pelo citoesqueleto.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO α-actinin-1 (m2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Actn1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Actn1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Actn1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína α-actinin-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Actn1 para a investigação da sinalização de α-actinin-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Actn1 críticos para a função α-actinin-1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Actn1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo α-actinin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo α-actinin-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Actn1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo α-actinin-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR α-actinin-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Actn1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Actn1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.