Plasmide CRISPR d'Activation (h) α1b Tubulin: sc-400021-ACT

TUBA1B code l’α1b-tubuline humaine, un isotype central de l’α-tubuline qui s’hétérodimérise avec la β-tubuline pour former les microtubules, assurant un support structurel essentiel au transport intracellulaire, à la polarité cellulaire et à l’assemblage du fuseau mitotique. Le remodelage dynamique des microtubules régit des processus tels que le trafic vésiculaire, la ciliogenèse et la ségrégation des chromosomes, via une régulation coordonnée par des protéines associées aux microtubules et par des modifications post-traductionnelles de la tubuline. La perturbation de l’homéostasie de la tubuline peut altérer l’organisation du cytosquelette, la progression du cycle cellulaire et les réponses au stress, reliant la biologie de la tubuline aux signaux prolifératifs et à l’adaptation cellulaire. En tant que composant du cytosquelette largement exprimé, l’α1b-tubuline est fréquemment utilisée pour étudier la dynamique des microtubules et des phénotypes dépendants du cytosquelette, pertinents pour le comportement des cellules cancéreuses et la neurobiologie du développement.

α1b Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TUBA1B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

α1b Tubulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TUBA1B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TUBA1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de α1b Tubulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TUBA1B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de α1b Tubulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie α1b Tubulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TUBA1B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.