Plásmido Doble Nickase (h) ZO-1: sc-400196-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ZO-1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ZO-1 (h) y el plásmido de doble nickasa ZO-1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a TJP1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ZO-1 Anticuerpo (R40.76): sc-33725
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ZO-1 | sc-400196-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ZO-1 | sc-400196-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TJP1 codifica la proteína de andamiaje de las uniones estrechas ZO-1, un adaptador multidominio que conecta las claudinas y la ocludina con el citoesqueleto cortical de actina para organizar la arquitectura de la barrera epitelial y endotelial. ZO-1 coordina el ensamblaje de las uniones, la mecanotransducción y la remodelación del citoesqueleto mediante interacciones con complejos de señalización y de polaridad, integrando procesos como la adhesión célula–célula, el control de la permeabilidad y la regulación del crecimiento dependiente del contacto. La alteración de la expresión o la localización de TJP1 se asocia con la desorganización de las uniones estrechas y con cambios en el transporte paracelular, fenómenos observados con frecuencia durante la inflamación, la fibrosis y la diseminación de células tumorales. Como regulador central de la estabilidad de las uniones, ZO-1 se estudia ampliamente en vías que gobiernan la integridad de la barrera y la dinámica epitelio–mesénquima.
ZO-1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TJP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TJP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TJP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TJP1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.