Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZNF575 (m): sc-430383

Présentation

Le gène murin Zfp575 code la protéine à doigts de zinc ZNF575, un régulateur transcriptionnel putatif se liant à l’ADN, appartenant à la famille des protéines à doigts de zinc de type C2H2, souvent associées à un contrôle séquence-spécifique de l’expression génique. Bien que l’annotation fonctionnelle demeure limitée, les protéines de cette classe modulent fréquemment des programmes transcriptionnels associés à la chromatine, qui influencent l’état cellulaire, la différenciation et les réponses à des signaux développementaux ou environnementaux. ZNF575 est donc pertinente pour l’étude des réseaux de régulation génique et des mécanismes épigénétiques qui façonnent la transcription spécifique des tissus. La dérégulation du contrôle transcriptionnel médié par les doigts de zinc est largement associée à des altérations de la prolifération, de la stabilité du génome et à des signatures d’expression liées aux maladies, ce qui soutient des études exploratoires de Zfp575 dans ces contextes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZNF575 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zfp575 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zfp575, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zfp575 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZNF575.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zfp575 pour l'étude de la signalisation de ZNF575, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zfp575 essentiels à la fonction de ZNF575
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zfp575 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZNF575 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZNF575 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zfp575. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZNF575 plasmide HDR (m) et le ZNF575 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zfp575 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zfp575 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.