ZBP-89 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404898-ACT

ZNF148 umano codifica il fattore di trascrizione a dita di zinco di tipo Krüppel ZBP-89, una proteina che si lega a promotori ricchi in GC e modula i programmi trascrizionali mediati dall’RNA polimerasi II che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress cellulare. ZBP-89 può agire come attivatore o repressore a seconda del contesto del promotore e del reclutamento di cofattori, influenzando lo stato della cromatina e l’avvio della trascrizione di geni coinvolti nel controllo della crescita e nell’apoptosi. Attraverso i suoi ruoli nella regolazione trascrizionale, ZBP-89 interseca vie che governano l’omeostasi epiteliale e la specificazione di linea cellulare, risultando rilevante per studi sulla proliferazione deregolata e sulle reti trascrizionali associate ai tumori. Alterazioni dell’attività di ZNF148 sono state esaminate nel contesto della biologia del cancro e della segnalazione infiammatoria, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per ricerche sulla regolazione genica e sulla funzione dei promotori.

ZBP-89 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ZNF148 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ZBP-89 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ZNF148 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ZNF148, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ZBP-89. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ZNF148 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ZBP-89 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ZBP-89 nelle cellule tumorali con espressione di ZNF148 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.