Zap-70 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423755

Descripción general

Zap70 codifica la tirosina cinasa citosólica ZAP-70, un mediador central de la señalización aguas abajo del receptor de células T (TCR) y del complejo CD3, que conecta el reconocimiento del antígeno con cascadas intracelulares de fosforilación. Tras la activación del TCR, ZAP-70 es reclutada a los ITAM fosforilados de las cadenas de CD3 y propaga la señalización a través del andamiaje LAT/SLP-76, impulsando la activación de PLCγ1, el flujo de calcio, la señalización MAPK y los programas transcripcionales NFAT/NF-κB/AP-1. En la biología inmunitaria del ratón, Zap70 es esencial para la selección de timocitos, la maduración de las células T y las respuestas efectoras, por lo que es un componente clave en estudios de inmunidad adaptativa y de redes de señalización linfocitaria. La actividad desregulada de la vía de ZAP-70 es relevante en modelos de inmunodeficiencia, autoinmunidad y biología de neoplasias linfoides, donde umbrales de señalización alterados influyen en el desarrollo y la activación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Zap-70 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Zap70 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Zap70 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Zap70 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Zap-70.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Zap70 para la investigación de la señalización de Zap-70, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Zap70 críticos para la función de Zap-70
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Zap70 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Zap-70 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Zap-70 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Zap70. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Zap-70 (m) y el plásmido HDR Zap-70 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Zap70 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Zap70 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.