Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZADH2 (h): sc-408358

Présentation

ZADH2 (protéine 2 contenant un domaine de déshydrogénase alcoolique liant le zinc) code une oxydoréductase putative présentant un motif de liaison au zinc de type déshydrogénase alcoolique, ce qui suggère un rôle dans la chimie redox cellulaire et le métabolisme. En tant que membre d’un ensemble plus large de déshydrogénases/réductases, ZADH2 devrait influencer des processus enzymatiques dépendants de cofacteurs, à l’interface du métabolisme des lipides et des aldéhydes, des réponses au stress oxydatif et de l’homéostasie métabolique mitochondriale ou cytosolique. Les variations d’activité des enzymes redox et métaboliques sont fréquemment associées à des modifications de la prolifération, de la différenciation et de l’adaptation au stress dans les tissus humains, faisant de ZADH2 une cible pertinente pour des études mécanistiques sur la reprogrammation métabolique et le contrôle des états cellulaires. Les recherches en cours sur l’expression et la fonction de ZADH2 dans différents contextes tissulaires étayent son utilisation dans des travaux centrés sur des voies biologiques plutôt que dans un modèle unique spécifique d’une maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZADH2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZADH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZADH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZADH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZADH2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZADH2 pour l'étude de la signalisation de ZADH2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZADH2 essentiels à la fonction de ZADH2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZADH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZADH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZADH2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZADH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZADH2 plasmide HDR (h) et le ZADH2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZADH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZADH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.