Z39Ig CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404067-ACT

ヒトVSIG4（Z39Ig）は、B7ファミリー関連の免疫調節受容体をコードしており、クッパー細胞を含む組織常在性マクロファージで主に発現し、自然免疫と獲得免疫のクロストークを調節します。VSIG4はC3断片に対する補体受容体として機能し、貪食によるクリアランスやT細胞活性化の抑制に関与することで、組織微小環境における炎症のトーンを形成します。これらの作用を通じて、Z39Igは補体介在性オプソニン化、マクロファージの極性化プログラム、過剰なサイトカイン産生を抑制する免疫チェックポイント様シグナル伝達に影響を与えます。VSIG4発現の異常やマクロファージ関連経路は、慢性炎症、線維化、感染生物学、腫瘍の免疫回避機構などの文脈で頻繁に研究されています。

Z39Ig CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性VSIG4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Z39Ig CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における VSIG4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はVSIG4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Z39Igの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のVSIG4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるZ39Ig依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびVSIG4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるZ39Ig経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。