Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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WTAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425635
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- WTAP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico WTAP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: WTAP Anticuerpo (D-7): sc-374280
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
WTAP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-425635 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Wtap codifica WTAP (proteína asociada al tumor de Wilms 1), un componente regulador central del complejo escritor de N6‑metiladenosina (m6A) del ARNm, que sostiene la actividad catalítica de METTL3/METTL14 y coordina la localización nuclear de la maquinaria de metilación. Mediante el control dependiente de m6A del procesamiento del pre‑ARNm, el empalme alternativo, la estabilidad de los transcritos y la traducción, WTAP influye en la progresión del ciclo celular, la especificación de linaje y los programas de expresión génica sensibles al estrés. La actividad de WTAP se integra con vías del metabolismo del ARN en los cuerpos nucleares tipo “speckles” y conecta la regulación epitranscriptómica con redes de señalización del desarrollo y de diferenciación. La deposición de m6A asociada a WTAP cuando está desregulada se ha implicado en cambios de proliferación y estados de diferenciación relevantes para la biología del cáncer, así como en fenotipos hematopoyéticos y del desarrollo en sistemas modelo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO WTAP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Wtap en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Wtap junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Wtap tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína WTAP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Wtap para la investigación de la señalización de WTAP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Wtap críticos para la función de WTAP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Wtap para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido WTAP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido WTAP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Wtap. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR WTAP (m) y el plásmido HDR WTAP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Wtap para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Wtap definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.