WTAP CRISPR Activationプラスミド (bovine): sc-437360-ACT

WTAP（Wilms tumor 1 関連タンパク質）は、mRNA の N6-メチルアデノシン（m6A）付加を担う「writer」複合体の中核構成因子であり、METTL3/METTL14 と協調して、メチル化依存的に RNA のスプライシング、安定性、核外輸送、翻訳を制御する。ウシ細胞では、WTAP に関連した m6A 制御が、転写後段階でのトランスクリプトーム再編成を通じて、細胞周期の進行、系譜決定、ストレス応答性の遺伝子発現プログラムに影響を与える。主要な制御性 mRNA の運命を規定することで、WTAP は増殖や分化を司る経路に作用し、WTAP 活性の変化は、複数の生物学的状況において、増殖の異常やがん様のシグナル伝達の破綻と関連づけられている。これらの特性により、WTAP は発生、代謝、疾患関連の細胞表現型におけるエピトランスクリプトーム制御の機構研究において重要な標的となる。

WTAP CRISPR活性化プラスミド（bovine）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WTAP CRISPR 活性化プラスミド (bovine) は、ヒト細胞株における 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体は転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WTAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然の遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWTAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、および発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWTAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。