Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423716
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Wnt-3a Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Wnt-3a-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Wnt-3a: sc-136163
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Wnt-3a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-423716 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das Mausgen **Wnt3a** kodiert das sekretierte Glykoprotein **Wnt-3a**, einen zentralen Liganden der kanonischen **Wnt/β‑Catenin-Signalgebung**, die die embryonale Musterbildung, die Aufrechterhaltung von Stammzellen und die Gewebemorphogenese reguliert. Die Bindung von Wnt‑3a an **Frizzled/LRP-Rezeptoren** stabilisiert **β‑Catenin** und ermöglicht dadurch **TCF/LEF‑abhängige** Transkriptionsprogramme, die Proliferation, Differenzierung und Zellschicksalsentscheidungen koordinieren. Neben Funktionen in der Entwicklung überschneidet sich die Wnt3a-Aktivität mit Signalwegen, die epithel–mesenchymale Dynamiken, Organogenese und regenerative Antworten steuern. Eine fehlregulierte Wnt‑3a-Signalgebung wird häufig im Zusammenhang mit aberranter β‑Catenin-Signalgebung untersucht, darunter onkogene Transformation und Entwicklungsdefekte, was Wnt‑3a zu einem zentralen Knotenpunkt für Signalweg- und Mechanismusforschung macht.
Das Wnt-3a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Wnt3a-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Wnt3a-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Wnt3a nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Wnt-3a-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Wnt3a-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Wnt-3a-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Wnt3a-Exone abzielen, die für die Wnt-3a-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Wnt3a-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Wnt-3a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Wnt-3a CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Wnt3a-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Wnt-3a HDR-Plasmid (m) und Wnt-3a HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Wnt3a-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Wnt3a-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.