Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3a (m): sc-423716

Présentation

Le gène murin **Wnt3a** code la glycoprotéine sécrétée **Wnt-3a**, un ligand clé de la signalisation canonique **Wnt/β-caténine** qui régule la mise en place des structures embryonnaires, le maintien des cellules souches et la morphogenèse des tissus. La liaison de Wnt-3a aux récepteurs **Frizzled/LRP** stabilise la **β-caténine**, permettant l’activation de programmes transcriptionnels dépendants de **TCF/LEF** qui coordonnent la prolifération, la différenciation et les décisions de destinée cellulaire. Outre ses rôles dans le développement, l’activité de Wnt3a s’articule avec des voies contrôlant les dynamiques épithélio-mésenchymateuses, l’organogenèse et les réponses régénératives. Une signalisation Wnt-3a dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes de signalisation β-caténine aberrante, notamment lors de transformations oncogéniques et de défauts du développement, ce qui en fait un nœud central pour les recherches sur les voies et les mécanismes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3a (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Wnt3a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Wnt3a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Wnt3a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wnt-3a.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Wnt3a pour l'étude de la signalisation de Wnt-3a, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Wnt3a essentiels à la fonction de Wnt-3a
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Wnt3a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Wnt-3a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Wnt-3a plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Wnt3a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Wnt-3a plasmide HDR (m) et le Wnt-3a (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Wnt3a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Wnt3a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.