Particules Lentivirales d'Activation (h) WDR20: sc-418266-LAC

WDR20 code une protéine d’échafaudage à répétitions WD qui agit comme cofacteur régulateur des complexes d’enzymes de déubiquitination, contribuant à coordonner le contrôle, dépendant de l’ubiquitine, de la stabilité des protéines et de la signalisation. En modulant la déubiquitination, WDR20 influence la protéostasie cellulaire et la dynamique des voies liées à la croissance cellulaire, aux réponses au stress et aux programmes transcriptionnels. Des perturbations des réseaux de signalisation de l’ubiquitine impliquant WDR20 ont été associées à une altération de l’homéostasie cellulaire et présentent une pertinence pour la biologie des maladies où la régulation médiée par l’ubiquitine est dérégulée, notamment dans des contextes de transformation maligne et de dysfonctionnement neurobiologique. Ainsi, WDR20 constitue un nœud utile pour analyser comment la déubiquitination ajuste l’activité des voies de signalisation et le renouvellement des protéines dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales WDR20 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de WDR20 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales WDR20 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription WDR20, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de WDR20. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif WDR20 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.