WDR20 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418266-ACT

WDR20は、WDリピートを含む調節タンパク質をコードしており、脱ユビキチン化酵素複合体の補助因子として機能して、ユビキチン依存的なタンパク質安定性およびシグナル伝達の制御を微調整します。脱ユビキチン化活性を調節することで、WDR20はプロテオスタシス、受容体やキナーゼ経路の持続時間、ならびに細胞増殖やストレス応答を形作る下流の転写プログラムに影響を及ぼし得ます。ユビキチンシグナルの破綻と脱ユビキチン化酵素の制御異常は、がん原性シグナル、神経生物学、免疫恒常性と広く関連しているため、WDR20はヒト細胞モデルにおける経路のリワイヤリング（再配線）を研究するうえで有用な結節点となります。WDR20を検討することは、ユビキチン動態の機構解析、ネットワークレベルの経路フィードバック、そして文脈依存的なシグナル強度の調節に関する研究を後押しします。

WDR20 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性WDR20の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

WDR20 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における WDR20 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はWDR20転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性WDR20の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のWDR20遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるWDR20依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびWDR20発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるWDR20経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。