WDR17 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-414101

Übersicht

WDR17 (WD-Repeat-Domäne 17) kodiert ein vorhergesagtes WD40-Repeat-enthaltendes Protein, dem eine Funktion als Gerüstprotein (Scaffold) für den Aufbau von Multiproteinkomplexen zugeschrieben wird und das regulierte Protein-Protein-Interaktionen im Zytoplasma sowie an membranassoziierten Orten unterstützt. Obwohl seine molekularen Partner bislang nicht vollständig charakterisiert sind, beeinflussen WD-Repeat-Proteine häufig den intrazellulären Transport, die Organisation des Zytoskeletts und die Signalintegration, indem sie Ubiquitinierung und andere posttranslationale Kontrollmechanismen koordinieren. Die Expression und genetische Variation von WDR17 wurden im Zusammenhang mit sensorischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen untersucht, was mit Rollen von WD-Repeat-Gerüstproteinen in spezialisierter Zellarchitektur und homöostatischen Signalwegen vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen WDR17 zu einem nützlichen Ziel, um die Verschaltung von Signalwegen in menschlichen Zellen zu analysieren, in denen Gerüstproteine die Lokalisation und Stabilität von Signalkomponenten modulieren.

Das WDR17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des WDR17-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des WDR17-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von WDR17 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die WDR17-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von WDR17-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der WDR17-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf WDR17-Exone abzielen, die für die WDR17-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere WDR17-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom WDR17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom WDR17 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des WDR17-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das WDR17 HDR-Plasmid (h) und WDR17 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von WDR17-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten WDR17-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.