VWA5B2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406578

Übersicht

VWA5B2 kodiert ein Protein, das eine von-Willebrand-Faktor-A-(VWA)-ähnliche Domäne enthält – ein modulares Motiv, das häufig an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist, welche die Organisation der extrazellulären Matrix, adhesionsbezogene Signalübertragung und die Gewebearchitektur unterstützen. Obwohl VWA5B2 weniger umfassend charakterisiert ist als viele VWA-Domänen-Proteine, deutet seine vorhergesagte Domänenzusammensetzung auf Funktionen beim Verankern oder beim Gerüstaufbau von Komplexen hin, die Zellanhaftung, Motilität und Mechanotransduktion beeinflussen. Eine veränderte Regulation von Adhäsions- und matrixassoziierten Prozessen ist häufig mit gestörter Wachstumskontrolle und invasiven Phänotypen verknüpft, wodurch VWA5B2 ein nützliches Ziel zur Untersuchung von Signalwegen ist, die Zell-Matrix-Interaktionen mit Genexpression und Zytoskelettdynamik koppeln. Eine genetische Perturbation von VWA5B2 kann daher helfen, seinen Beitrag zu kontextabhängigen Stressantworten und zur Netzwerk-Neuverschaltung zu definieren, wie sie in krankheitsrelevanten Zellzuständen beobachtet werden.

Das VWA5B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VWA5B2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VWA5B2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VWA5B2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VWA5B2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VWA5B2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VWA5B2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VWA5B2-Exone abzielen, die für die VWA5B2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VWA5B2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VWA5B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VWA5B2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VWA5B2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VWA5B2 HDR-Plasmid (h) und VWA5B2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VWA5B2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VWA5B2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.