VWA5B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406578

概要

VWA5B2は、フォン・ヴィレブランド因子A（VWA）様ドメインを含むタンパク質をコードしています。このドメインは、細胞外マトリックスの構築、接着に関連するシグナル伝達、組織構築を支えるタンパク質間相互作用にしばしば関与するモジュール型モチーフです。VWA5B2は多くのVWAドメインタンパク質ほど詳細には解析されていないものの、予測されるドメイン構成から、細胞の接着、運動性、メカノトランスダクションに影響を与えるアンカー／足場複合体に関与する可能性が示唆されます。接着やマトリックス関連プロセスの制御異常は、増殖制御の破綻や浸潤性表現型と結び付くことが多く、VWA5B2は細胞—マトリックス相互作用を遺伝子発現や細胞骨格ダイナミクスに連結する経路を調べるうえで有用な標的となります。したがって、VWA5B2を遺伝学的に改変することで、疾患に関連する細胞状態で観察される状況依存的なストレス応答やネットワーク再配線に対する本遺伝子の寄与を明確にする助けになります。

VWA5B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVWA5B2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VWA5B2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VWA5B2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VWA5B2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VWA5B2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VWA5B2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VWA5B2の機能に不可欠なVWA5B2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VWA5B2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VWA5B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVWA5B2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VWA5B2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VWA5B2 HDRプラスミド（h）および VWA5B2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVWA5B2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVWA5B2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。