Plásmido CRISPR de Activación (h) VSTM3: sc-404147-ACT

TIGIT, también conocido como VSTM3, codifica un inmunorreceptor inhibidor expresado en células T activadas, células T reguladoras y células NK, que ayuda a mantener la homeostasis inmunitaria. Al unirse a ligandos de la familia del receptor del poliovirus como PVR (CD155) y PVRL2 (CD112), TIGIT modula la señalización tipo ITIM y contrarresta las vías coestimuladoras, influyendo en la citotoxicidad, la producción de citocinas y la función de la sinapsis inmunitaria. La alteración de la señalización de TIGIT se ha implicado en el escape inmunitario y en una inmunidad antitumoral disfuncional, así como en contextos de inflamación crónica y autoinmunidad, lo que lo convierte en un nodo clave en la biología de los puntos de control inmunitarios. Como receptor de superficie que integra señales de adhesión e inhibición, TIGIT ofrece un punto de entrada mecanístico para estudiar interacciones receptor–ligando, programas transcripcionales de linfocitos agotados y la comunicación cruzada con la señalización de CD226/DNAM-1.

VSTM3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TIGIT sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VSTM3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TIGIT en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TIGIT, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VSTM3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TIGIT y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VSTM3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VSTM3 en células tumorales con expresión de TIGIT silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.