VPS39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404507

Übersicht

VPS39 kodiert eine zentrale Untereinheit des HOPS-Tethering-Komplexes, der die Fusion von späten Endosomen mit Lysosomen sowie von Autophagosomen mit Lysosomen vermittelt und damit die endolysosomale Reifung und den Abbau von Fracht unterstützt. Durch die Koordination der Rab-GTPase-abhängigen Membran-Anheftung (Tethering) und der SNARE-getriebenen Fusion trägt VPS39 zur lysosomalen Homöostase, zum Rezeptorumsatz und zum makroautophagischen Fluss bei. Eine Störung von HOPS-Komponenten beeinträchtigt den vesikulären Transport und kann zur Anreicherung nicht abgebauten Materials, zu veränderter Signalübertragung von Endosomen und zu Stressantworten führen, die mit neurodegenerativen sowie lysosomalen Speicher-erkrankungsähnlichen Phänotypen in Zusammenhang stehen. VPS39 ist daher relevant für die Forschung zu Autophagie, endolysosomaler Dynamik und krankheitsassoziierten Defekten im intrazellulären Vesikeltransport.

Das VPS39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VPS39-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VPS39-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VPS39 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VPS39-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VPS39-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VPS39-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VPS39-Exone abzielen, die für die VPS39-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VPS39-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VPS39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VPS39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VPS39-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VPS39 HDR-Plasmid (h) und VPS39 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VPS39-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VPS39-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.