VPS26B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410249

概要

VPS26Bは、エンドソームからゴルジ体への逆行輸送（リトリーバル）および膜貫通タンパク質のエンドソーム・リサイクリングを制御する、レトロマー（retromer）貨物選別複合体の中核サブユニットをコードします。VPS26Bは、貨物認識とエンドソームのソーティング機構を協調させることで、受容体の恒常性、小胞輸送、オルガネラの完全性の維持に寄与し、これらの過程はシグナル伝達の強度や膜タンパク質のターンオーバーに影響します。レトロマー関連経路は、オートファジー、リソソーム機能、極性輸送とも交差するため、VPS26Bは神経細胞の維持や一般的なプロテオスタシスの研究において重要です。エンドソーム輸送の破綻やレトロマー機能不全は、神経変性や発生異常の表現型と関連づけられており、疾患関連の細胞モデルにおけるVPS26Bの機構解明を支持します。

VPS26B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVPS26B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VPS26B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VPS26Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、VPS26Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、VPS26Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VPS26B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• VPS26Bの機能に不可欠なVPS26Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VPS26Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• VPS26B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVPS26B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VPS26B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  VPS26B HDRプラスミド（h）および VPS26B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVPS26Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVPS26B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。