VPS26B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-410249

Descripción general

VPS26B codifica una subunidad central del complejo retromer de selección de carga, que regula la recuperación desde el endosoma hacia el Golgi y el reciclaje endosomal de proteínas transmembrana. Al coordinar el reconocimiento de la carga con la maquinaria de clasificación endosomal, VPS26B ayuda a mantener la homeostasis de receptores, el tráfico vesicular y la integridad de los orgánulos, procesos que influyen en la amplitud de la señalización y en el recambio de proteínas de membrana. Las vías asociadas al retromer se entrecruzan con la autofagia, la función lisosomal y el transporte polarizado, lo que hace que VPS26B sea relevante para estudiar el mantenimiento neuronal y la proteostasis general. La desregulación del tráfico endosomal y la disfunción del retromer se han vinculado a fenotipos neurodegenerativos y del desarrollo, lo que respalda la investigación mecanística de VPS26B en modelos celulares relevantes para enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VPS26B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen VPS26B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del VPS26B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de VPS26B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VPS26B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en VPS26B para la investigación de la señalización de VPS26B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de VPS26B críticos para la función de VPS26B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de VPS26B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VPS26B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido VPS26B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus VPS26B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VPS26B (h) y el plásmido HDR VPS26B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología VPS26B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana VPS26B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.