VDAC3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423663

Übersicht

Vdac3 kodiert den spannungsabhängigen Anionenkanal 3 (VDAC3), eine β-Fass-Pore in der äußeren Mitochondrienmembran, die den Austausch von Metaboliten und Ionen zwischen Zytosol und Mitochondrien reguliert. Als Teil der VDAC-Familie trägt VDAC3 zur Kopplung der oxidativen Phosphorylierung, zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotenzials und zur redoxsensitiven Kontrolle der mitochondrialen Homöostase bei. VDAC3-assoziierte Prozesse überschneiden sich mit Apoptose-Signalwegen, dem Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und mitochondrialen Qualitätskontrollmechanismen, die zelluläre Stressantworten prägen. Veränderungen der VDAC3-Funktion wurden in Zusammenhängen untersucht, die mit mitochondrialer Dysfunktion einhergehen, darunter bioenergetische Ungleichgewichte und gewebespezifische Defekte, die mit Mechanismen metabolischer und neurodegenerativer Erkrankungen verknüpft sind.

Das VDAC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vdac3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vdac3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vdac3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VDAC3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vdac3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VDAC3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vdac3-Exone abzielen, die für die VDAC3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vdac3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VDAC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VDAC3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vdac3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VDAC3 HDR-Plasmid (m) und VDAC3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vdac3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vdac3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.