Plasmide CRISPR/Cas9 KO VCX-C (h): sc-416596

Présentation

VCX3B code VCX-C, un membre de la famille de protéines VCX/Y, enrichie dans les tissus de la lignée germinale mâle et associée à des programmes transcriptionnels spécifiques du testicule. Les protéines de cette famille sont impliquées dans la régulation de la gestion des ARNm et du contrôle post-transcriptionnel au cours de la spermatogenèse, reliant ainsi VCX-C à des processus tels que le métabolisme de l’ARN et la différenciation des cellules germinales. VCX3B se situe dans une région du chromosome X fréquemment touchée par des variations du nombre de copies, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude de la sensibilité au dosage et de la stabilité du génome. La dérégulation des gènes de la famille VCX a été étudiée dans le contexte de phénotypes d’infertilité masculine et de réarrangements génomiques liés au chromosome X, ce qui soutient des investigations mécanistiques dans des modèles de biologie de la reproduction et du développement.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VCX-C (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VCX3B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VCX3B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VCX3B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VCX-C.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VCX3B pour l'étude de la signalisation de VCX-C, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VCX3B essentiels à la fonction de VCX-C
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VCX3B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VCX-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VCX-C plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VCX3B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VCX-C plasmide HDR (h) et le VCX-C (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VCX3B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VCX3B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.