vanin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423682

Übersicht

Vnn1 kodiert Vanin-1, eine glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankerte Pantetheinase, die Pantethein hydrolysiert und dabei Pantothensäure (Vitamin B5) und Cysteamin erzeugt; damit verknüpft sie den extrazellulären Stoffwechsel mit dem Redoxgleichgewicht. Die Aktivität von Vanin-1 beeinflusst die Homöostase von Coenzym A, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie inflammatorische Signalwege und spielt eine wichtige Rolle an epithelialen Barrieren und in der Kommunikation zwischen Immunzellen und Gewebe. In Mausmodellen wurde Vnn1 mit der Regulation der Leukozytenrekrutierung, Gewebeschädigungsantworten und metabolischer Entzündung in Verbindung gebracht, was es für Studien zu Kolitis, hepatischem Stress und kardiometabolischen Phänotypen relevant macht. Seine Expression reagiert häufig auf Umweltstressoren und kann Signalwege modulieren, die die Glutathion-Dynamik und die Zytokinproduktion steuern.

Das vanin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vnn1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vnn1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vnn1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die vanin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vnn1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der vanin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vnn1-Exone abzielen, die für die vanin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vnn1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom vanin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom vanin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vnn1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das vanin-1 HDR-Plasmid (m) und vanin-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vnn1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vnn1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.