Plasmide CRISPR/Cas9 KO VAMP-3 (h): sc-402306

Présentation

VAMP3 code la protéine membranaire associée aux vésicules 3 (VAMP-3), une v-SNARE qui médiatise des événements de fusion membranaire nécessaires à l’exocytose constitutive et régulée. Elle participe au trafic vésiculaire entre les endosomes de recyclage et la membrane plasmique, soutenant le recyclage des récepteurs, la sécrétion de cytokines et l’acheminement de protéines membranaires lors de la migration et de la polarisation cellulaires. La fonction de VAMP-3 recoupe des voies de tri endosomal et d’assemblage des complexes SNARE qui modèlent l’activation des cellules immunitaires et les interactions hôte–pathogène. Un trafic vésiculaire dérégulé impliquant VAMP3 a été étudié dans des contextes tels que l’inflammation, des altérations de la dynamique des transporteurs de glucose et des changements associés au cancer touchant le renouvellement membranaire et l’invasion.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VAMP-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VAMP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VAMP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VAMP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VAMP-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VAMP3 pour l'étude de la signalisation de VAMP-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VAMP3 essentiels à la fonction de VAMP-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VAMP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VAMP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VAMP-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VAMP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VAMP-3 plasmide HDR (h) et le VAMP-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VAMP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VAMP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.