VAC14 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-408584-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- VAC14O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase VAC14 (h) e o Plasmídeo Double Nickase VAC14 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para VAC14. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:VAC14 Anticorpo (C-10): sc-271831
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
VAC14 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-408584-NIC | 20 µg | $410.00 |
VAC14 codifica um componente de andaime do complexo PIKfyve–FIG4–VAC14, que regula o metabolismo de fosfoinositídeos, particularmente a interconversão de PI(3)P e PI(3,5)P2 nas membranas endolisossomais. Ao controlar a homeostase de PI(3,5)P2, VAC14 sustenta a maturação de endossomos, a função dos lisossomos, o fluxo autofágico e eventos de tráfego de membranas que mantêm a proteostase celular. A interrupção da sinalização dependente de VAC14 perturba a morfologia de vacúolos/lisossomos e as respostas ao estresse em neurônios e outros tipos celulares, conectando essa via a fenótipos neurodegenerativos e do neurodesenvolvimento relatados para defeitos no eixo regulatório de PI(3,5)P2. Como resultado, VAC14 é amplamente estudado em modelos de disfunção endolisossomal, manutenção axonal e respostas celulares a estresse nutricional e osmótico.
VAC14 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus VAC14 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de VAC14. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função VAC14. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com VAC14 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.