Plasmide CRISPR/Cas9 KO V-ATPase D1 (m): sc-419255

Présentation

Atp6v0d1 code la sous-unité D1 du domaine V0 de la H\+-ATPase vacuolaire (V-ATPase), une pompe à protons qui assure l’acidification des endosomes, des lysosomes et d’autres compartiments intracellulaires dans les cellules de souris. La régulation du pH dépendante de la V-ATPase soutient l’endocytose médiée par les récepteurs, le flux autophagique, la protéolyse lysosomale et le trafic membranaire, et contribue également à l’homéostasie des organites, en lien avec la détection des nutriments par mTORC1. L’altération des composants de la V-ATPase est largement associée à des défauts de tri vésiculaire, à une capacité de dégradation diminuée et à des modifications des signaux cellulaires pouvant influencer la neurodégénérescence, la fonction des cellules immunitaires et l’adaptation métabolique liée au cancer. Atp6v0d1 constitue donc un point d’entrée pertinent pour étudier comment l’acidification des organites s’articule avec la protéostasie et les voies de réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO V-ATPase D1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Atp6v0d1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Atp6v0d1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Atp6v0d1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine V-ATPase D1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Atp6v0d1 pour l'étude de la signalisation de V-ATPase D1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Atp6v0d1 essentiels à la fonction de V-ATPase D1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Atp6v0d1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le V-ATPase D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le V-ATPase D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Atp6v0d1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le V-ATPase D1 plasmide HDR (m) et le V-ATPase D1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Atp6v0d1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Atp6v0d1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.