USP2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424700

Descripción general

Usp2 codifica la peptidasa 2 específica de ubiquitina (USP2), una enzima desubiquitinante que revierte el recambio proteico dependiente de ubiquitina para modular la proteostasis y la duración de las señales. Al recortar cadenas de ubiquitina en sustratos seleccionados, USP2 regula procesos como la progresión del ciclo celular, la apoptosis, las respuestas al daño en el ADN y la señalización inflamatoria, y se ha vinculado a la regulación de programas metabólicos y circadianos. La actividad alterada de USP2 se ha asociado con fenotipos de crecimiento desregulado y de adaptación al estrés en modelos experimentales, lo que la convierte en un nodo útil para investigar el control que ejerce el sistema ubiquitina–proteasoma sobre la homeostasis celular. En sistemas murinos, la alteración de Usp2 se utiliza comúnmente para estudiar cómo la desubiquitinación ajusta la comunicación cruzada entre vías en tejidos y en contextos relevantes para el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO USP2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Usp2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Usp2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Usp2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína USP2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Usp2 para la investigación de la señalización de USP2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Usp2 críticos para la función de USP2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Usp2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido USP2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido USP2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Usp2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR USP2 (m) y el plásmido HDR USP2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Usp2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Usp2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.