Plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT8 (m2): sc-423604-KO-2

Présentation

Ugt8a code l’UDP-galactose: céramide galactosyltransférase (UGT8), une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la formation du galactosylcéramide, un précurseur essentiel du sulfatide et d’autres galactolipides. Cette étape enzymatique soutient la biosynthèse des sphingolipides et des lipides de la myéline, en influençant la composition des microdomaines membranaires, les interactions axone–glie et la maturation des oligodendrocytes dans le système nerveux de la souris. Un déséquilibre des galactolipides a été associé à une myélinisation dérégulée et à des phénotypes neuro-inflammatoires, faisant d’UGT8 un point d’intérêt pour l’étude de la biologie neuronale et gliale pilotée par les lipides. L’activité d’UGT8 est également utilisée pour explorer plus largement les flux de céramide et le remodelage des voies des glycosphingolipides en conditions de développement ou de stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT8 (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ugt8a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ugt8a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ugt8a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UGT8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ugt8a pour l'étude de la signalisation de UGT8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ugt8a essentiels à la fonction de UGT8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ugt8a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UGT8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UGT8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ugt8a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UGT8 plasmide HDR (m) et le UGT8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ugt8a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ugt8a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.