Plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B5 (m): sc-423603

Présentation

L’UGT2B5 murine est une UDP‑glucuronosyltransférase microsomale qui catalyse la conjugaison de l’acide glucuronique à des substrats lipophiles, augmentant leur solubilité dans l’eau afin de favoriser leur élimination. Cette activité de métabolisme de phase II soutient l’élimination des xénobiotiques et contribue au contrôle homéostatique de petites molécules endogènes via la glucuronidation. Les enzymes de la famille UGT2B s’inscrivent dans les programmes de détoxification hépatiques et extra-hépatiques et peuvent façonner les réponses cellulaires à l’exposition chimique en modulant la disponibilité des substrats et les profils de métabolites. Les altérations de la capacité de glucuronidation sont fréquemment étudiées en toxicologie, dans le contexte du remodelage métabolique lié à l’inflammation, ainsi que pour la variabilité dépendante du génotype dans le devenir des médicaments et la sensibilité aux substances chimiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UGT2B5 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ugt2b5 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ugt2b5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ugt2b5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UGT2B5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ugt2b5 pour l'étude de la signalisation de UGT2B5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ugt2b5 essentiels à la fonction de UGT2B5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ugt2b5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UGT2B5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UGT2B5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ugt2b5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UGT2B5 plasmide HDR (m) et le UGT2B5 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ugt2b5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ugt2b5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.