UGP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408778-ACT

ヒトUGP2はUDP-グルコースピロホスホリラーゼ2をコードしており、細胞質に局在する酵素として、グルコース-1-リン酸とUTPからUDP-グルコースを可逆的に生成する反応を触媒します。これにより、グリコーゲン合成や糖鎖付加（グリコシル化）の中心的なヌクレオチド糖前駆体が供給されます。UGP2はUDP-グルコースの利用可能性を制御することで、炭水化物フラックス、プロテオグリカンおよび糖タンパク質の生合成、さらに栄養やストレス刺激に対するより広範な代謝適応に影響を与えます。UGP2活性の変化は、グルコース処理の破綻や、細胞外マトリックスおよびタンパク質のグリコシル化パターンの変化と関連し得て、これらは細胞増殖、分化、シグナル伝達に影響を及ぼします。こうした機能から、UGP2は、疾患関連の細胞モデルにおける代謝リプログラミング、糖鎖依存的制御、ならびに遺伝子型—表現型関係を研究するうえで有用な結節点となります。

UGP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UGP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UGP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUGP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUGP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUGP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。