Plasmide CRISPR/Cas9 KO UFD1 (m): sc-423598

Présentation

Ufd1l code UFD1, un composant central du complexe « ségrégase » UFD1–NPL4–VCP/p97, qui reconnaît et extrait des substrats polyubiquitinylés en vue de leur traitement ultérieur par le système ubiquitine–protéasome. En couplant la signalisation par l’ubiquitine au remodelage des protéines dépendant de l’ATP, UFD1 soutient la dégradation associée au réticulum endoplasmique (ERAD), le contrôle qualité des protéines mal repliées et la protéostasie en situation de stress cellulaire. Cette voie interagit également avec la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et la régulation de programmes transcriptionnels via le renouvellement contrôlé de régulateurs clés. La dérégulation des cofacteurs de p97 et des composants de l’ERAD a été associée à des phénotypes de stress protéotoxique ainsi qu’à des contextes de neurodégénérescence et de biologie du développement, ce qui fait de Ufd1l un nœud pertinent pour des études mécanistiques dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UFD1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ufd1l dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ufd1l, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ufd1l à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UFD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ufd1l pour l'étude de la signalisation de UFD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ufd1l essentiels à la fonction de UFD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ufd1l pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UFD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UFD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ufd1l. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UFD1 plasmide HDR (m) et le UFD1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ufd1l pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ufd1l définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.