UFD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423598

概要

Ufd1l は、ユビキチン‐プロテアソーム系による下流の処理に向けてポリユビキチン化基質を認識し、抽出する UFD1–NPL4–VCP/p97 セグレガーゼ複合体の中核構成因子である UFD1 をコードします。UFD1 は、ユビキチンシグナル伝達を ATP 依存的なタンパク質リモデリングに結び付けることで、小胞体関連分解（ERAD）、ミスフォールドタンパク質の品質管理、ならびに細胞ストレス下でのプロテオスタシスを支えます。この経路はまた、主要な制御因子の制御された分解を介して、細胞周期の進行、DNA 損傷応答、転写プログラムの制御とも連動します。p97 の補因子や ERAD 構成要素の機能不全は、タンパク質毒性ストレスの表現型や、神経変性および発生生物学の文脈と関連づけられており、Ufd1l はマウスモデルにおける機構研究の有用な結節点となります。

UFD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUfd1l遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ufd1l内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ufd1lのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UFD1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UFD1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ufd1l欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UFD1の機能に不可欠なUfd1lエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ufd1lゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UFD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUFD1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ufd1l遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UFD1 HDRプラスミド（m）および UFD1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUfd1lホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUfd1l標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。