UDG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403189

Übersicht

Das humane UNG-Gen kodiert die Uracil-DNA-Glykosylase (UDG), ein zentrales Enzym der Basenexzisionsreparatur, das die Entfernung von Uracil aus der DNA einleitet, welches durch Desaminierung von Cytosin oder durch Fehlinkorporation von dUMP während der Replikation entsteht. Durch das Ausschneiden von Uracil und die Erzeugung einer apurinischen/apyrimidinischen (AP-)Stelle zur nachgeschalteten Verarbeitung trägt UNG zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität bei und begrenzt die Mutagenese sowohl im nukleären als auch im mitochondrialen Genom. Die UNG-Aktivität ist mit Replikationsstress-Antworten, DNA-Schadenssignalgebung und Signalwegen verknüpft, die desaminierungsgetriebene Läsionen entgegenwirken, einschließlich Prozessen, die für die Antikörperdiversifizierung und die angeborene Restriktion retroviraler DNA relevant sind. Eine Fehlregulation der Uracilreparatur und der damit verbundenen Reparaturintermediate wurde mit einer erhöhten Mutationslast und Phänotypen genomischer Instabilität in Verbindung gebracht, die in der Krebsbiologie, Immunologie und in Wirt–Pathogen-Interaktionen untersucht werden.

Das UDG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UNG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UNG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UNG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UDG-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UNG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UDG-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UNG-Exone abzielen, die für die UDG-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UNG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UDG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom UDG CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UNG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UDG HDR-Plasmid (h) und UDG HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UNG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UNG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.