Ubr4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408481

Übersicht

Humanes **UBR4** kodiert die E3-Ubiquitin-Ligase **Ubr4**, ein großes zytosolisches Protein, das zur ubiquitinabhängigen Proteinkontrolle und zum Proteinumsatz beiträgt. Ubr4 ist mit dem **N‑End-Rule‑Signalweg** sowie umfassenderen **Proteostase-Programmen** verknüpft, die die Proteinstabilität, den Transport (Trafficking) und die stressadaptive Umgestaltung des zellulären Proteoms beeinflussen. Über diese Funktionen kann UBR4 Prozesse wie **Endozytose**, die **zellzyklusassoziierte Regulation von Proteinen** und **Antworten auf proteotoxischen Stress** mitsteuern. Eine Fehlregulation der Ubiquitin-Signalübertragung und der Proteostase wird mit **neurodegenerativen Phänotypen** und **krebsassoziierten zellulären Zuständen** in Verbindung gebracht, was UBR4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Verschaltung von Ubiquitin-Signalwegen macht.

Das Ubr4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UBR4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UBR4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UBR4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ubr4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UBR4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ubr4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UBR4-Exone abzielen, die für die Ubr4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UBR4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ubr4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Ubr4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UBR4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ubr4 HDR-Plasmid (h) und Ubr4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UBR4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UBR4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.