Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423574

Übersicht

Ubb kodiert Ubiquitin, einen hochkonservierten Modifikator aus 76 Aminosäuren, der kovalent an Zielproteine gebunden wird, um deren Stabilität, subzelluläre Lokalisation und Signalübertragung zu regulieren. Ubiquitinierung koordiniert den proteasomenabhängigen Abbau, die Endozytose und DNA-Schadensantworten und ist über ubiquitinbindende Adapterproteine mit der Autophagie verknüpft, um die Proteostase zu steuern. In Mauszellen trägt ubiquitinabhängige Signalgebung breit zur Zellzyklusprogression, zu Stressantworten und zur Regulation von Immunwegen bei – vermittelt über die Topologie von Ubiquitinketten und die Spezifität von E3-Ligasen. Eine gestörte Ubiquitin-Homöostase und veränderte Proteasomaktivität werden häufig als mechanistische Readouts in Studien zu Neurodegeneration, Entzündung und krebsrelevanter Stressanpassung genutzt, was Ubb zu einem zentralen Knotenpunkt für die Analyse von Signalwegen macht.

Das Ubiquitin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ubb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ubb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ubb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Ubiquitin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ubb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Ubiquitin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ubb-Exone abzielen, die für die Ubiquitin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ubb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Ubiquitin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Ubiquitin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ubb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Ubiquitin HDR-Plasmid (m) und Ubiquitin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ubb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ubb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.